新藤黄酸固体脂质纳米粒在大鼠体内药物代谢动力学研究

Ｗｅｂｓｉｔｅ　ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ａｈｔｃｍ．ｅｄｕ．ｅｅｌ　６８　Ｅ—ｍａｉｌ　ａｈｘｂｂｊｂ＠１６３．ＣＯｒｎ　安徽中医学院学报第３２卷第３期２０１３年６月ＪＯＵＲＮＭ　ＯＦ　ＡＮＨＬ兀ＴＣＭ　）Ｉ　Ｉ．ＥＧＥ　Ｖｏ１．３２　Ｎｏ．３　Ｊｕｒｋ　２０１３　新藤黄酸固体脂质纳米粒在大鼠　体内药物代谢动力学研究　黄　霞，罗　晴，朱婷婷，周　恺，贾步云，程　皓，季兆洁，林彤远，陈卫东　（安徽中医药大学药学院，安徽合肥２３００３１）　［摘要］目的　考察新藤黄酸固体脂质纳米粒（ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ—ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＧＮＡ　ＳＩ　Ｎ）在大鼠　体内的药物代谢动力学特征。方法　对大鼠分别腹腔注射ＧＮＡ和ＧＮＡ—ＳＩ　Ｎ，采用高效液相色谱法测定　ＧＮＡ在大鼠体内的血药浓度，ＤＡｓ　２．１软件拟合计算药物代谢动力学参数。结果　腹腔注射含等量ＧＮＡ　的ＧＮＡ溶液和ＧＮＡ—ＳＩ　Ｎ后，ＧＮＡ～ＳＬＮ组的峰浓度是ＧＮＡ溶液组的３．Ｏ６倍，药时曲线下面积约为　ＧＮＡ溶液组的３倍，体内滞留时间约为ＧＮＡ溶液组的２倍。ＧＮＡ—ＳＬＮ显著增加了ＧＮＡ的体内吸收，且　延长了ＧＮＡ在体内的作用时间（Ｐ＜０．０５，或Ｐ＜０．０１）。结论　ＳＬＮ包载可改变ＧＮＡ的体内行为，提高　其血药浓度，延长其体内循环时间，有望改善其治疗效果。　［关键词］新藤黄酸；固体脂质纳米粒；药物代谢动力学　［中图分类号３Ｒ９６９．１［文献标志码］Ａ［－ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—２２１９．２０１３．０３．０２２　新藤黄酸（ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＧＮＡ）是从藤黄中　特性，为ＧＮＡ新制剂开发和开展临床研究提供实　验依据。　１　材料　提取分离的主要有效成分之一，现代研究　。。　证明，　ＧＮＡ能够抑制多种肿瘤细胞的增殖，如鼻咽癌　ＣＮＥ一１细胞、肝癌ＨｅｐＧ２细胞、肺癌Ａ５４９细胞；体　１．１药品与试剂　ＧＮＡ对照品、原料药、藤黄酸　（ｇａｒｃｉｎｉａ　ａｃｉｄ，ＧＡ）对照品（对照品纯度≥９８％，安　内药效学研究ｌ　Ｊ　发现，ＧＮＡ在抑制肿瘤生长的同　时，对正常细胞（如人脐静脉内皮细胞）没有毒性，并　且不影响大鼠脾、肾等器官的功能。但ＧＮＡ为杂　氧蒽酮类化合物，难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮　等有机溶剂，属于强脂溶性成分（１ｏｇＰ＝４．０２），给药　困难；大鼠药物代谢动力学研究显示，静脉给药后，　ＧＮＡ被快速消除，半衰期很短，生物利用度差。　固体脂质纳米粒（ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，　徽中医药大学药学院ＧＮＡ课题组提供）；ＧＮＡ—　ＳＩ　Ｎ（实验室自制）；甲醇（色谱纯，上海信可有限公　司）；其他试剂为分析纯。　１．２仪器与设备ＬＣ一１５Ｃ高效液相色谱仪（日本　岛津），包括ＬＣ一１５Ｃ高压输液泵、ＳＰＤ—ｌ５Ｃ紫外检　测器；ＬＣ　４０１６型低速离心机（安徽中科中佳科学仪　器有限公司）；ＡＢ１３５　Ｓ型十万分之一电子天平　（Ｍｅｔｔｌｅｒ　Ｔｏｌｅｄｏ，德国）；ＫＱ一３ＯＯＢ型超声波清洗器　ＳＩ　Ｎ）是１９９０年代初发展起来的一种可替代乳剂、　脂质体和聚合物纳米粒的新型胶体给药系统【　，是　采用天然或合成的生理相容性固体脂质为载体材　料，将药物包裹或分散于其中制成的固体胶粒结构　体系，相对于传统制剂，可提高药物的物理化学稳定　性，防护光、湿、热敏感性药物的降解，具有缓释、靶　（江苏省昆山市超声仪器有限公司）；８５—２数显恒温　磁力搅拌器（江苏省金坛市）；氮吹浓缩装置（ＭＴＮ一　２８００Ｄ）。　１．３动物　ＳＤ大鼠（生产许可证号：ＳＣＸＫ（皖）　２０１１　００１），雌雄各半，体质量２２０￣２５０　ｇ，安徽医科　大学动物饲养中心提供。　２方法与结果　向等特征　Ｊ。根据研究，ＳＬＮ包载药物后可改变体　内行为，提高药物的生物利用度　；对于抗癌药物，　可通过多种机制，提高抗癌效果ｌ８。　２．１　ＧＮＡ体内血药浓度测定　２．１．１色谱条件：色谱柱Ｃ（）ＳＭ（）ＳＩＩ　Ｃ１８柱（４．６　新藤黄酸固体脂质纳米粒（ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ—　ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＧＮＡ　ＳＩ　Ｎ）为水分散体系　的混悬液，可实现注射给药，有望改善ＧＮＡ的抗癌　活性。本研究通过观察ＧＮＡ在大鼠体内药物代谢　ｍｍ×２５０　ｍｍ，５肚ｍ），流动相为甲醇０．１　磷酸溶　液（９０：１０），流速为１．０　ｍｌ／ｍｉｎ，柱温３０　Ｃ，检测波　长为３６０　ｎｍ，进样量２Ｏ　ｌ。　动力学行为，初步阐明ＧＮＡ—ＳＬＮ药物代谢动力学　作者简介：黄霞（１９８１一），女，硕十研究生　通信作者：陈　东，ａｎｚｈｏｎｇｄｏｎｇ＠１２６．ｃｏｎｌ　２．１．２　血浆样品处理：取血浆１００／，１，加ＧＡ溶液　１０　Ｉ（内标，浓度为３０．２　ｆｆｇ／ｍ１），混合均匀后加２　ｍｌ乙酸乙酯，涡旋振荡５　ｍｉｎ，３　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１０　ａｉｒｎ；取上清液１．５　ｍｌ，４０　Ｃ氮气吹干，取２００　ｌ，甲　Ｗｅｂｓｉｔｅ　ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ａｈｔｃｍ．ｅｄｕ．ＣＦＩ　Ｅ—ｍａｉｌ　ａｈｘｂｂｊｂ＠１６３．ＣＯｒｌｌ　安徽中医学院学报第３２卷第３期２０１３年６月ＪＯＵＲＮ￣ｄ　ＯＦ　ＡＮＨＵＩ　ＴＣＭ　ＣＯＬＩ　ＥＧＥ　Ｖｏ１．３２　Ｎｏ．３　Ｊｕｎ　２０１３　醇复溶残渣，进样２Ｏ　ｌ。以样品与内标峰面积比进　行定量分析。　２．１．３专属性考察：取大鼠空白血浆、ＧＮＡ和ＧＡ　对照品溶液、ＧＮＡ和ＧＡ空白血浆混合溶液，按　“２．１．２”项方法操作，在“２．１．１”项色谱条件下进样，　考察ＧＡ和血浆中内源性杂质是否干扰ＧＮＡ的测　定。结果表明，ＧＡ与ＧＮＡ分离完全，峰形良好。　ＧＡ和内源性杂质不干扰ＧＮＡ的测定。见图１。　时间／ｒａｉｎ　注：Ａ．ＧＮＡ＋ＧＡ甲醇溶液；Ｂ．ＧＮＡ＋ＧＡ血浆溶液；　Ｃ．空白血浆溶液；Ｄ．给药后４０　ｒａｉｎ　ＧＮＡ—ＳＩ　Ｎ溶液；Ｅ．给药　后４０　ｍｉｎ　ＧＮＡ溶液。　图１　各样品的高效液相色谱图　２．１．４标准曲线的制备：精密吸取空白血浆１０份，　每份１００　１，置于离心管中。再加入ＧＮＡ系列标　准溶液及ＧＡ标准溶液，分别配制成３２、ｌ６、８、４、２、　ｌ、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２５　ｔ￣ｇ／ｍｌ的ＧＮＡ溶液。　按“２．１．２”项方法操作，按“２．１．１”项色谱条件进样　２Ｏ“ｌ。记录ＧＮＡ、ＧＡ的峰面积，计算二者比值　（ｒａｔｉｏ，Ｒｉ），以Ｒｉ为纵坐标，质量浓度（ｆ）为横坐标　进行线性回归，绘制标准曲线。结果ＧＮＡ标准曲　线方程为：Ｒｉ一０．４７２　９　Ｃ＋０．１１６　０（ｒ一０．９９９　９），　线性范围为０．０６２　５～３２．０００　０￣ｇ／ｍｌ，结果表明　ＧＮＡ在该线性范围内浓度与峰面积比值线性关系　良好。　２．１．５精密度与稳定性：精密吸取１００　ｌ空白血　浆，按“２．１．４”项下方法配制ＧＮＡ低、中、高３种浓　度（分别为０．２５、２、１６￣ｇ／ｍ１），各浓度样本５份。　按“２．１．２”项方法操作，在“２．１．１”项色谱条件下进　样２ｏ　ｌ，将所得的Ｒｉ值代人标准曲线，计算相应的　浓度，考察日内、日间精密度。结果３个质量浓度样　本的日内精密度ＲＳＤ分别为４．３９　、８．６６　、　２．０７　；日间精密度ＲＳＤ分别为３．１７　、９．０６　、　２．４４　将新鲜配制的ＧＮＡ低、中、高３种浓度（分别　为０．２５、２、１６￣ｇ／ｍ１）样本在室温放置８　ｈ，按　“２．１．２”项方法操作，在“２．１．１”项色谱条件下进样　分析，所得样本的ＲＳＤ均小于１Ｏ　。　２．１．６　回收率试验：精密吸取１００　ｌ空白血浆，按　“２．１．４”项下方法配制ＧＮＡ低、中、高３种浓度（分　别为０．２５、２、１６￣ｇ／ｍ１）。按“２．１．２”项方法操作，　在“２．１．１”项色谱条件下进样２Ｏ肚ｌ，将所得的Ｒｉ值　代人标准曲线，得相应的浓度，再计算回收率。相对　回收率一测定浓度／加人浓度×１００　，３个浓度的　平均回收率分别为９８．７９　、１０５．８Ｏ　、１０１．７９　（扎一５）。　２．１．７定量下限：定量下限为０．０６２　５￣ｇ／ｍｌ，ＲＳＤ＝　４．９１　，ｎ＝５。　２．２　药物代调十动力学参数　取ＳＤ大鼠１２只，实　验前禁食１２　ｈ，可自由饮水，随机分成２组，每组６　只，雌雄各半。按２．５　ｍｇ／ｋｇ的剂量分别腹腔注射　ＧＮＡ溶液、ＧＮＡ—ＳＬＮ混悬液，给药后分别于０、５、　１０、２Ｏ、４０、６Ｏ、９０、１２０、１８０、２４０、３６０、４８０、６００　ｍｉｎ　自大鼠眼眶后静脉丛取血约０．５　ｍｌ。血样置于肝　素化的离心管中，３　０００　ｒ／ｍｉｎ离心２Ｏ　ｍｉｎ，分离上　层血浆于冰箱中保存。按“２．１．２”项方法操作，在　“２．１．１”项色谱条件下进样分析，计算血药浓度。所　得大鼠血浆药物浓度数据采用ＤＡＳ　２．１药物代谢　动力学软件进行拟合。　根据大鼠腹腔给予ＧＮＡ和ＧＮＡ—ＳＩ　Ｎ混悬液　后血药浓度绘制药物浓度一时间曲线，见图２。以非　房室模型拟合的药物代谢动力学参数见表１。由图　２可知，ＧＮＡ溶液组峰浓度出现在第１个时间点（５　ａｒｉｎ），主要原因可能在于ＧＮＡ在５　ｍｉｎ前完全吸　收入血。而ＧＮＡ—ＳＬＮ组各时间点的药物浓度都　高于ＧＮＡ组，峰浓度是ＧＮＡ给药组的３倍，而且　出现两峰现象。　ＧＮＡ和ＧＮＡ＿ＳＬＮ两组的药物浓度一时问曲线　下面积（ａｒｅａ　ｌｌｒｌｄｅｒ　ｃｕｒｖｅ，ＡＵ　）分别为（２．４６７±　０．２０６）、（７．６８３±０．８９）ｍｇ・Ｌ／ｈ，后者是前者的　３．１倍，生物利用度得到显著性提高。而且ＧＮＡ—　ＳＬＮ的消除速率明显减小，驻留时间延长，半衰期　延长。　３　讨论　本研究考察了ＧＮＡ—ＳＬＮ与ＧＮＡ在大鼠体内　行为的差异，ＧＮＡ—ＳＬＮ组的生物利用度显著提高。　但出现双峰现象，可能存在的原因有：①腹腔给药　时，药物主要通过肠系膜直接吸收人血，由于ＧＮＡ～　ＳＬＮ纳米粒粒子大小不一，不同范围粒径的粒子吸　Ｗｅｂｓｉｔｅ　ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ，ａｈｔｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ　Ｅ—ｍａｉｌ　ａｈｘｂｂｊｂ＠１６３．ｃｏｒｎ　７Ｏ　安徽中医学院学报第３２卷第３期２０１３年６月ＪＯＵＲＮＭ　ＯＦ　ＡＮＨＵＩ　ＴＣＭ　ＣＯＬＬＥＧＥ　Ｖｏ１．３２　Ｎｏ．３　ＪｕｒＬ　２０１３　收的途径和速度可能不同，使血药浓度在不同的时　于长效缓释　。另一方面，ＳＩ　Ｎ吸收入血后，易被网状　间出现峰值；②本研究所制备的ＧＮＡ—ＳＬＮ的包封　内皮系统视为外源物而摄取，加速ＳＬＮ的消　…。　率约为６１　，黏附在ＳＬＮ纳米粒表面和较多的未　被包裹的药物结晶可能首先释放人血，形成首个药　物峰，随着基质的降解，ＧＮＡ从纳米粒内部开始释　放，形成第二个吸收峰。　从平均驻留时间（ｍｅａｎ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ＭＲＴ）来　看，虽然ＧＮＡ－ＳＩ　Ｎ较ＧＮＡ有所延长，但差异没有统　计学意义，与体外释放的缓释特性差异很大。其原因　为：一方面，ＳＩ．Ｎ在体内被各种内源性物质降解，加快　０　２　４　６　８　１０　ｌ２　了药物的释放，削弱了缓释的效果。根据文献，药物在　时间／ｈ　体内释放速度受载体基质的影响，长链脂肪酸类更利　图２大鼠血浆中ＧＮＡ的　平均药物浓度一时间曲线（”一６）　表１　大鼠腹腔给予ＧＮＡ—ＳＩ　Ｎ和ＧＮＡ溶液后药物代谢动力学参数　注：与ＧＮＡ—ＳＬＮ比较，＊Ｐ＜０．０５，＊　＊Ｐ＜０．０１；ｔ　末端消除半衰期；ＣＩ　ｚ／Ｆ：血管外经过生物利用度校正的清除率　（无ｚ代表房室模型）；ｃ…：药物峰浓度。　参考文献：　一一霉／暑　）／　避　目　ｓｔａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｒｔ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｉｏｐｈａｒｍ，２０００，５０　［１］Ｙａｎ　Ｆ，４　Ｗａｎｇ　Ｍ，Ｃｈｅｎ　Ｈ，ｅｔ３　２　１　　ａ１Ｏ　．Ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｄｉ—　（１）：１６１－１７７．　ａｔｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　［６２　Ｗｉｓｓｉｎｇ　ＳＡ，Ｋａｙｓｅｒ　Ｏ，Ｍａｉｌｅｒ　ＲＨ．Ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐ　ａｎｄ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｋｔ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｎａ—　ａｒｔｉｃｌｅｓ　ｆｏｒ　ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊ］．Ａｄｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ　ｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ＣＮＥ一１　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａ—　Ｒｅｖ，２００４，５６（９）：１２５７　１２７２．　ｃｏｌ，２０１１，６５２（１—３）：２３—３２．　ＥＴ］Ｓｏｕｔｏ　ＥＢ，Ｍａｉｌｅｒ　ＲＨ．Ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　［２］Ｙａｎ　Ｆ，Ｗａｎｇ　Ｍ，Ｉ．ｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｃｈａｎｇｅｓ［Ｊ］．Ｈａｎｄｂ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ—－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ｐｈｏｓ—－　Ｅｘｐ　Ｐｈａｒｍａｃｏ１，２０１０，１９７：１１５－１４１．　ｐｈｏ—。Ｅｒｋｌ／２　ａｎｄ　ｐｈｏｓｐｈｏ—。ｐ３８　ＭＡＰＫ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏ—。　［８］Ｗｏｎｇ　ＨＬ，Ｂｅｎｄａｙａｎ　Ｒ，Ｒａｕｔｈ　ＡＭ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ—　ｍａ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　ＬＪ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｔｏｘｉｃｏｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１２，　ａｐｙ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｄｒｕｇｓ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎ—　３３（２）：１８１—１９０．　ｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．Ａｄｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ　Ｒｅｖ，２００７，５９（６）：４９１—　［３］Ｃｈｅｎｇ　Ｈ，Ｓｕ　Ｊｊ，Ｐｅｎｇ　ＪＹ，ｅｔ　ａ１．Ｇａｍｈｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ—　５Ｏ４．　ｈｉｂｉｔｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ５４９　ｃｅｌｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕ—　［９］Ｘｉｅ　Ｓ，Ｚｈｕ　Ｌ，Ｄｏｎｇ　ｚ，ｅｔ　ａＬ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ—　ｃｉｎｇ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐ３８　ＭＡＰＫ　ｃａｓｃａｄｅ　ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ—ｌｏａｄｅｄ　ｓｏｌｉｄ　［－ｊｑ．Ｊ　Ａｓｉａｎ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｓ，２０１１，１３（１１）：９９３—１００２．　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ　［４３　ＩＡ　Ｑ，Ｃｈｅｎｇ　Ｈ，Ｚｈｕ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　Ｓｕｒｆ　Ｂ　Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ，２０１１，８３（２）：３８２—３８７。　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ５４９　ｃｅｉｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ—ｉｎｄｕｃｉｎｇ　［１　ｏ］Ｗａｎｇ　Ｙ，ｗｕ　ｗ．Ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｅｖａｄｉｎｇ　ｏｆ　ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ　ｕｐｔａｋｅ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌｌ，２０１０，３３　ｏｆ　ｓｔｅａｌｔｈ　ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｂｙ　ｍｏｕｓｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　（３）：４１５－４２０．　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ，２００６，１３（３）：１８９—１９２．　［５］　Ｍｔｉｌｌｅｒ　ＲＨ，Ｍｔｉｄｅｒ　Ｋ，Ｇｏｈｌａ　Ｓ．Ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉ—　（收稿日期：２０１２—１１　１９）　ｃｌｅｓ（ＳＩ　Ｎ）ｆｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎ　Ｖｉｖｏ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　Ａｃｉｄ—Ｓｏｌｉｄ　Ｌｉｐｉｄ　Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｉｎ　Ｒａｔｓ　ＨＵＡＮＧ　Ｘｉａ，ＬＵＯ　Ｑｉｎｇ，ＺＨＵ　Ｔｉｎｇ—ｔｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｋａｉ，ＪＩＡ　Ｂｕ—ｙｕｎ，ＣＨＥＮＧ　Ｈａｏ，Ｊ　Ｚｈａｏ—ｊ　ｉｅ，Ｌ　Ｉ　Ｎ　Ｔｏｎｇ—ｙｕａｎ，ＣＨＥＮ　Ｗｅｉ—ｄｏｎｇ　（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３１，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ—ｓｏｌｉｄ　Ｗｅｂｓｉｔｅ　ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ａｈｔｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ　Ｅ－ｍａｉｌ　ａｈｘｂｂｊｂ＠１６３．ｃｏｒｎ　安徽中医学院学报第３２卷第３期２０１３年６月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＨＵＩＴＣＭＣＯＬＩ　ＥＧＥ　Ｖｏ１．３２　Ｎｏ．３　Ｊｕｎ　２０１３　天麻素通过下调ＥＲＫ１／２～ｐ３８　信号通　路　保护谷氨酸损伤的ＰＣ１　２　细胞　蒋根灵，李庆林　（省部共建新安医学教学部重点实验室安徽中医药大学科研实验中心，安徽合肥２３００３８）　［摘要］目的　研究天麻素（ｇａｓｔｒｏｄｉｎ，Ｇａｓ）通过调控ＥＲＫ１／２一ｐ３８信号通路保护谷氨酸损伤的ＰＣ１２细胞。　方法　建立谷氨酸损伤的ＰＣ１２细胞模型；甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力；Ｈｏｃｈｅｓｔ　３３２５８染色荧光　显微镜观察细胞凋亡形态；罗丹明１２３染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位；Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法检测细胞内　ｐ３８、ＥＲＫ１／２、Ｐ—ｐ３８、ｐ－ＥＲＫ１／２蛋白表达。结果　天麻素明显抑制谷氨酸诱导的ＰＣ１２细胞凋亡，在０．１～　１０／，ｍｏｌ／Ｌ剂量范围内呈一定的量效关系；天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低，下调　Ｐ—ｐ３８、ｐ－ＥＲＫ１／２蛋白的表达。结论　天麻素对谷氨酸损伤的ＰＣ１２细胞具有保护作用，其机制可能与升高　线粒体膜电位水平，下调Ｐ—ｐ３８、Ｐ—ＥＲＫ１／２蛋白表达，抑制细胞凋亡有关。　［关键词］天麻素；ＰＣ１２细胞；谷氨酸；ｐ—ｐ３８；ｐ－ＥＲＫｌ／２；细胞凋亡　［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标志码］Ａ　ＦＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—２２１９．２０１３．０３．０２３　天麻素（ｇａｓｔｒｏｄｉｎ）又称天麻苷，是中药天麻中　１１０８０７—２００２０５）：中国药品生物制品检定所。　的主要活性成分之一ｌ１］。中药天麻作为一种抗脑血　１．３　主要仪器　ＭＣＯ一１７５型ＣＯ。培养箱：日本　管病药物，目前已广泛应用于临床。本实验室前期　ＳＡＮＹＯ公司；Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＣＫＸ４１型倒置显微镜和　对天麻素的神经保护作用进行了初步探讨，结果发　Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＢＸ５１型荧光显微镜：日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司；　现天麻素能够通过抑制细胞凋亡的途径发挥抵抗谷　ＳＷ—ＣＪ一１Ｆ型洁净工作台：苏净集团安泰公司；　氨酸诱导的ＰＣ１２细胞的损伤＿２］。然而，其作用的　ＥＩ　Ｘ８００ｕｖ型酶标仪：美国Ｂｉｏ—Ｔｅｋ公司；ＦＡＣＳｃａｎ　机制尚未被深度阐明。鉴于此，笔者在前期研究的　流式细胞仪：Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司；Ｇｅｌ　ＤＯＣ　ＸＲ　基础上，进一步研究天麻素通过抑制神经细胞凋亡　凝胶成像分析系统：美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司。　发挥神经保护作用的机制，为天麻素的临床应用提　１．４　主要试剂　达尔伯克氏培养基（Ｄｕｌｌｂｅｃｃｏ’Ｓ　ｍｉｎｉ—　供理论依据。　ｍｕｍ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｍｅｄｉｕｍ，　便Ｍ）：美国Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ公司；胎　１　材料　牛血清（ｆｅｔａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ。Ｈ　）：美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；　１．１　细胞　大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（ＰＣ１２）细胞　Ｈｏｃｈｅｓｔ　３３２５８染色试剂盒、罗丹明１２３荧光测定试剂盒：　株：购自中国科学院上海细胞生物学研究所。　江苏省南京凯基生物科技发展有限公司；乳酸脱氢酶　１．２药物天麻素（纯度＞９８．０　，白色粉末，批号　（１ａｃｔａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｔｍｓｅ，ＬＤＨ）试剂盒：南京建成生物工　程研究所；ｐ３８、ＥＲＫｌ／２和ｆｆａｃｔｉｎ抗体：美国Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　作者简介：蒋根灵（１９８７一），男，硕士研究生　生物技术公司；１＞ｐ３８、ｐ－ｐＥＲＫ１／２：美国细胞信号　通信作者：李庆林，ｑｉｎｇｌｉｎ＿ｌｅｅ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎ　技术公司；电化学发光（ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＧＮＡ—ＳＬＮｓ）ｉｎ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ＧＮＡ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＧＮＡ－ＳＩ　Ｎ　ｇｒｏｕｐ．　Ｂｏｔｈ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ１ｙ　ｉｎｊ　ｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ＧＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍ　ｏｆ　ＧＮＡ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｒ　ＧＮＡ—　ＳＬＮ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＮＡ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｄａｔａ　ｆｉｔｔｉｎｇ　ｕｓｉｎｇ　ＤＡＳ　２．１　ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ｄｒｕｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＧＮＡ—ＳＬＮ　ｇｒｏｕｐ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｗｏ　ｐｅａｋｓ　ａｆｔｅｒ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ—　ｔｉｏｎ，ａｒｅａ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ（ＡＵＣ），ａｎｄ　ｍｅａｎ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＮＡ－ＳＬＮ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　３．０６，３，　ａｎｄ　２　ｔｉｍｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＮＡ　ｇｒｏｕｐ．ＧＮＡ－ＳＬＮ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ａｂｓｏｒｂｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＮＡ　ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｄｅｄ　ｉｔｓ　ａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＧＮＡ。ＧＮＡ—ＳＬＮ　ｈａｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ．ＧＮＡ－ＳＩ　Ｎ　ｉｓ　ｅｘｐｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｈａｖｅ　ａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ．　ＥＫｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｇａｍｂｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ；ｓｏｌｉｄ　ｌｉｐｉｄ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ