什么是RFLP?主要的技术步骤是什么?
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发布时间：2022-04-23 06:11
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时间：2023-05-17 10:54
*性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RF LP )简称PCR-RFLP 分析。
它主要是设计适当的扩增引物，使扩增片段包括一个或数个多态性的*性内切酶识别序列，在PCR 扩增后用该*酶切割PCR 产物，根据电泳后酶切(Amp-FLP) 对VNTR.STR 等重复序列，因重复单位数目的不同而呈现高度多态。
因此利用重复序列两侧的特异性引物进行PCR 扩增，所得扩增片段具有高度多态性，这些不同长度的等位片段可用PAGE 分离。
应用程序
基因组中 RFLP 变异的分析以前是基因组作图和遗传疾病分析的重要工具。如果研究人员最初试图确定特定疾病基因的染色体位置，他们将分析受该疾病影响的家庭成员的 DNA，并寻找与该疾病具有相似遗传模式的 RFLP 等位基因（参见遗传连锁）。
一旦定位了疾病基因，对其他家庭的 RFLP 分析就可以揭示谁有患病风险，或者谁可能是突变基因的携带者。RFLP 测试用于通过分析基因组中的独特模式来识别和区分生物。它还用于鉴定*性位点之间基因座中的重组率。
RFLP 分析也是早期遗传指纹识别方法的基础，可用于鉴定从犯罪现场提取的样本、确定亲子关系以及表征动物种群的遗传多样性或繁殖模式。
方法
通常，一个样本的DNA首先被提取和纯化。纯化后的DNA可以用PCR反应扩增。随后，用*性核酸内切酶切成“*性片段”，每种内切酶只能切除可被它识别的特定序列。随后，*性片段通过琼脂糖凝胶电泳将不同长度的片段分开。得到的凝胶可以通过南方墨点法(Southern blotting)进行强化。
RFLP是第一种被用于作图研究的DNA标记，它们一般有如下特征：
1、出于染色体上的位置相对固定；
2、同一亲本及其子代相同微点上的多态性片段特征不变；
3、同一凝胶电泳可显示不同多态性片段，具有共显性特点。
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时间：2023-05-17 10:54
RFLP是*性DN*段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism）的缩写。本方法是采用*性内切酶消化不同个体的同源DNA分子，通过电泳，DNA杂交，不同个体的DNA会产生不同长度的DN*段，显示不同的电泳谱型，这就是RFLP。
一种*性内切酶消化某一物种或群体的所有样品形成的*性图谱组成靶DNA对*性内切酶特异性的RFLP，因而RFLP分析主要取决于所用的*性内切酶的种类和数量。
RFLP是有许多基因突变类型引起的，一个以上碱基的替换、插入或缺失都可导致某种*性内切酶识别位置的丧失或产生一个新的识别位点，从而减少或增加片段数目并改变片段长度。
对碱基替换引起的基因突变，使某一*位点丧失或获得一个新的*位点而产生的RFLP称为多态性。只有已知这些位点的DNA序列，才可制备探针，用各种不同的*性内切酶检测出这种多态性。这种多态性一般局限于一些特定的核苷酸位置上。在群体水平上，这种变异不是随机分布的，不同群体发生的RFLP频率也不相同。在个体水平上，这些变异可以是纯合的，也可以是杂合的。对于DNA结构变异，包括较长片段的缺失、重复和插入等。
RFLP的主要的技术步骤是：
（1）DNA样品的制备 采用CTAB法或SDS法制备DNA样品。
（2）*性内切酶消化 *性内切酶选择，对DNA样品进行消化。
（3）分子杂交 它可鉴定核酸分子间的同源性。DNA呈螺旋形结构，其中一条链的核酸序列互补。在去掉变性条件后，互补的单链DNA分子能够退火复性形成双链DNA分子，把这一过程称为分子杂交。
（4）*性片断的数字分析。
