大肠菌群的检验是比较常见的微生物检验，但谁能给个详细的操作步骤或者图片啊，越详细越好！
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发布时间：2022-04-21 06:32
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热心网友
时间：2023-11-06 16:39
在这里有比较详细的，大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠菌群的快速检测。大肠菌群显蓝绿色，其它菌显*或无色，革兰氏阳性菌被抑制。
成份 (g/L)
特殊营养物质 47.55
显色剂 0.35
琼脂 13.0
pH 7.0-7.2 25 ℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 47.9g 加入 1000ml 蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过 1 分钟。分装三角瓶， 116 ℃ 高压灭菌 15 分钟。取 1ml 制备好的样品液加入直径为 9cm 无菌平皿中心，倾入冷却至 45 -50 ℃ 培养基约15ml ，混匀，凝固后， 36 ± 1 ℃ 倒置培养 18 ～ 24h 。或冷却至 45-50 ℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时，加入适当稀释度的样品液 1ml ，涂布于培养基上， 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h 。
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1 、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液
2 、取样品液 1ml 加入 冷却至 45-50 ℃显色培养基中混匀或 涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h ，选用有 30 ～ 200 个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群菌落。大肠菌群典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或*菌落。
总大肠菌群 = 蓝绿色菌落
4 、对可疑大肠菌群菌落可划线接种到营养琼脂平板上， 36 ± 1 ℃ 培养 12-16 小时，挑取单菌落做大肠菌群 BGLB 发酵试验。
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈乳白色。制备好的平板呈透明无色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h 小时：
质控菌株 ATCC 生长情况 菌落颜色
单增李氏菌 27853 -/+ 无色
金*葡萄球菌 25923 -/+ 无色
大肠杆菌 25922 +++ 蓝色
沙门氏菌 +++ 无色
大肠菌群 +++ 蓝色
方法的局限性
本培养基鉴定 大肠菌群 ，少数情况下可能会出现假阳性，但不会出现假阴性，有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠菌群典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或*菌落。
如果要采购的话在青岛海博商城里也有 http://www.hopebiol.com/shop52/
参考资料：http://www.hopebiol.com
热心网友
时间：2023-11-06 16:40
操作步骤
1 检样稀释
1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
4 证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
