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随着分子生物学技术的高速发展,核酸提取方法的优化成为关键。传统方法如酚抽提法、亲和层析柱、密度梯度离心法等虽在早期广泛应用,但其复杂性、得率低下及对化学试剂的依赖,逐渐被现代分子生物学及材料学所淘汰。目前,市面上应用较为广泛的核酸提取试剂盒主要包括离心柱法提取试剂盒与磁珠核酸提取试剂盒。
离心柱法提取试剂盒采用硅胶滤膜作为核酸吸附载体,原理在于:在高浓度盐离子和较低pH值环境下,硅胶滤膜和核酸通过盐离子形成的阳离子桥结合,实现有效吸附,而蛋白质、代谢产物等污染物则不易结合,被洗脱。而磁珠法提取核酸,利用磁性物质如Fe3O4作为内核,具有超顺磁性,通过外部磁场实现磁性分离,结合SiO2外层具有很强的生物安全性和化学稳定性,表面丰富的硅羟基官能团,实现核酸吸附与洗脱的过程。整个流程大致分为五步:裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱,每一步的核酸产物可通过磁力架磁性分离或自动化仪器操作实现自动化、高通量操作。
磁珠法提取核酸的显著优势在于操作简单快速、自动化、高通量、需求样本量低、质量稳定可靠且安全无毒。具体而言,操作简便快速,整个流程可实现一键启动,适配于自动化核酸提取仪,实现数十乃至数百个样品的快速提取。对于微量材料,也可获得高浓度的纯净核酸,且提取过程不涉及有毒化学试剂,保障操作安全。
然而,在核酸提取过程中,需要注意裂解过程的充分性、裂解液用量的适宜、清洗次数的控制、以及在提取量较低时磁珠用量的合理调整。裂解过程中,确保核酸充分暴露,Buffer用量适中,以实现磁珠与核酸的有效结合。样本量的增加在一定范围内可提升提取效果,但对于低含量样品,增加样本量反而可能引入更多杂质,降低最终提取质量。清洗过程应控制在2~4次,过多清洗会增加核酸损失。最后,提取的核酸可能存在蛋白及盐类残留,可通过添加蛋白酶K降解蛋白,使用高浓度有机溶剂清洗,减少盐类对酶活的抑制,以防止杂质对后续应用产生影响。
舒桐公司提供粒径为800nm的硅羟基核酸提取磁珠,具有优异的磁响应速度和均匀性,适配于自动化核酸提取仪,显著提高提取效率,提取出的核酸收率和纯度均较高。如有需求,欢迎咨询。