12个WB翻车原因 | 带配图详细讲解,再也不用担心实验失败了
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发布时间：24分钟前
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时间：4分钟前
西方蛋白质印迹（Western Blot）实验在科学研究中广泛运用，其清晰的条带图可以为文章增添亮点。然而，该实验步骤繁杂，细节众多，想要取得理想结果需要投入大量的时间和精力去摸索实验技巧。小V整理了12个高频出现的Western Blot实验异常情况，并配图详细解析，以帮助你识别并解决实验中可能遇到的问题。
01. 无背景无条带
原因分析：如果标记物正常，但在其他位置无条带，最可能的原因是一抗与非目标抗体结合，或者二抗种属错误，如兔一抗与鼠二抗结合。解决办法：更换抗体。
02. 高背景
原因分析：封闭不充分、一抗浓度过高、洗膜时间不足。解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数。
03. 非特异性条带
原因分析：一抗非特异性结合蛋白。解决办法：更换一抗。若无其他更好抗体，建议采用阴性对照和阳性对照确定目的条带。极少数情况下，可能是高一抗浓度引起非特异性结合。
04. 条带边缘规则白圈
原因分析：暂时未找到特定的解决办法。
05. 出现黑点和黑斑
原因分析：暂时未找到特定的解决办法。
06. 条带拖尾
原因分析：一抗浓度太高或孵育时间过长。解决办法：根据情况调整一抗浓度，缩短孵育时间。
07. 非均一性背景
原因分析：膜在孵育或洗涤过程中风干。解决办法：操作过程中注意不要让膜风干。
08. 条带变形
原因分析：SDS-PAGE胶中存在气泡或不溶性颗粒。解决办法：在配胶过程中避免使用含有杂质的液体。
09. 条带不均一
原因分析：暂时未找到特定的解决办法。
10. 最边缘条带弯曲
原因分析：电泳电流不均一，玻璃板右下侧有缺口。解决办法：更换新的玻璃板，避免使用两侧的孔。上样应在胶的中间，确保电流均匀。
11. 条带形成笑脸，marker正常
原因分析：考虑电泳环节，多半是凝胶未凝固好。解决办法：确保电泳条件适宜。
12. 曝光结果条带扭曲
原因分析：转膜问题，分子量大的蛋白转膜时间过长，导致转膜装置产热过多，无法维持低温环境，造成条带扭曲。解决办法：在条件允许的情况下直接在4℃下进行转膜，使用冰水混合物及时更换转膜液，并确保转膜液预先冷却。
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